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实时荧光定量PCR系统的软件特点及反应体系和条件
点击次数:283 发布时间:2021/8/22 19:30:36

  实时荧光定量PCR系统的软件特点:
  ●反应板设置指南软件使实验设计非常简单,包括复杂的多色荧光实验;

  ●可选择快速、标准或者9600反应模式;

  ●实时监测扩增曲线;

  ●实验过程中可以增加PCR循环数;

  ●自动设置荧光基线,自动计算荧光阈值使数据分析大大简化;

  ●可在同一反应板采用多种标准曲线对靶基因进行定量,可以简化工作流程以及下游产物分析;

  ●基因表达相对定量软件提供强大的结果分析显示,可以自动将多达10块96孔板基因表达实验数据同时分析,并自动去除无关项数据;

  ●自动SNP分析软件可以简单直观的图表输出分型结果并自动进行分型质量评分;

  ●解离曲线数据采集操作简单,观察方便,可以在仪器运行时观察解离曲线数据;

  ●观察实时扩增曲线时可以非常方便的标定所对应的样品孔位置;

  ●光源使用时间监测及仪器系统自我诊断程序。

  实时荧光定量PCR系统的反应体系和条件:
  (1)模板浓度与纯度:模板的初始浓度越低,结果的重复性越差。初始浓度越高,超出了反应体系的线性范围,则需要对模板进行稀释,否则随着底物的过早耗尽,可能出现假阴性结果。如果待测模板的浓度处于PCR反应体系的较低检出限附近。则需要检测双份以保证结果的可靠性。

  (2)酶及其浓度:TaqDNA聚合酶有两种,一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶:另一种是从大肠埃希菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应需要2。5U的酶。浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。

  (3)Mg2+的浓度:Mg2+对PCR扩增的特异性和产物有显著影响。Mg2+的浓度过高,会增加引物二聚体的形成;Mg2+的浓度过低,会降低TaqDNA聚合酶的活性。