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实时荧光定量PCR系统
技术的基本原理
在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光基团，这些荧光物质有其特定的波长。仪器可以自动检出，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR进程，在PCR循环中，测量的信号将作为荧光阈值的坐标。并且引入一个Ct值概念，Ct值是指产生可被检测到得荧光信号所需的小循环数，是在PCR循环过程中荧光信号由本底开始进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。
荧光阈值相当于基线荧光信号的平均信号标准偏差的10倍。一般认为在荧光阈值以上所测出的荧光信号是一个可信的信号，可以用于定义一个样本的Ct值。通常用不同浓度的标准样品的Ct值来产生标准曲线，然后计算相对方程式。
方程式的斜度可以用来检查PCR的效率，所有标准曲线的线性回归分析需要存在一个高相关系数，这样才能认为实验的过程和数据是可信的，使用这个方程式计算出未知样本的初始模板量。实时荧光定量PCR仪都有软件，可以从标准曲线中自动地计算出未知样本的初始模板量。
实时荧光定量PCR系统的软件特点：
●反应板设置指南软件使实验设计非常简单，包括复杂的多色荧光实验；
●可选择快速、标准或者9600反应模式；
●实时监测扩增曲线；
●实验过程中可以增加PCR循环数；
●自动设置荧光基线，自动计算荧光阈值使数据分析大大简化；
●可在同一反应板采用多种标准曲线对靶基因进行定量，可以简化工作流程以及下游产物分析；
●基因表达相对定量软件提供强大的结果分析显示，可以自动将多达10块96孔板基因表达实验数据同时分析，并自动去除无关项数据；
●自动SNP分析软件可以简单直观的图表输出分型结果并自动进行分型质量评分；
●解离曲线数据采集操作简单，观察方便，可以在仪器运行时观察解离曲线数据；
●观察实时扩增曲线时可以非常方便的标定所对应的样品孔位置；
●光源使用时间监测及仪器系统自我诊断程序。
